Molekularbiologie
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B. Praktikum
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1. Theorie
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– Polymerase Kettenreaktion (PCR)
Allgemein
Die Polymerase Kettenreaktion ist eine Methode, um DNA zu vervielfältigen.
Voraussetzungen
Ablauf
Bei der PCR werden drei grundlegende Schritte 20-30 mal wiederholt: Denaturierung (Melting), Primerhybridisierung (Annealing), und die Elongation. Bei jedem Zyklus wird die erhaltene DNA verdoppelt.
- Melting (Schmelzen bei 96°C für 30-120 Sekunden)
- Annealing (Anlagerung der Primer bei 55-75°C für 30-120 Sekunden)
- Elongation (Synthese der fehlenden Stränge bei 65-80°C für 30-120 Sekunden)
– Gene / Mutationen / Polymorphismen
Allgemein
Grundlagen des genetischen Fingerabdrucks beim Menschen
Der VNTR Locus D1S80
– Molekulargenetische Analyse eines Gendefektes am Beispiel des HbS-Gens
Allgemein
Struktur des Beta-Globin-Gens im menschlichen Genom
Genomische Diagnostik
– Einige Methodische Grundlagen der DNA-Präparation
DNA-Gewinnung aus Wangenepithelzellen für die PCR
Präparation genomischer DNA aus kernhaltigen Blutzellen
2. Praktischer Teil
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– Vervielfältigung und Nachweis des D1S80-Genlocus
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– RFLP-Analyse des HbA- bzw. HbS-Gens
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– Präparation genomischer DNA aus kernhaltigen Blutzellen
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3. Antestate
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